dynamic BIOSENSORS heliX plus Reducing Agent Kit 1

Helstu eiginleikar

• Leyfir minnkun tvísúlfíðtengja með TCEP.
• Samhæft við prótein og mótefni (MW > 20 kDa).
• Staðarsértæk minnkun mótefna.
• Tafarlaus tenging minnkaðra sameinda er möguleg (sjá notendahandbók HK-MAL).
• Hægt er að draga úr mörgum bindlum á sama tíma.
• Inniheldur hvarfefni fyrir tvö einstök afoxunarhvörf.

Vörulýsing

Pöntunarnúmer: RK-PA-1

Tafla 1. Upplýsingar um innihald og geymslu

Efni	Cap	Upphæð	Geymsla
TCEP (500 mM)	Rauður	2 x 20 µL	-20°C
Minnkandi biðminni [1]	Hvítur	2 x 1.8 ml	-20°C
Hreinsunarsnúningur	Rauður	4 x	2-8°C
2.0 ml hvarfglös fyrir hreinsunarsúlu		4 x	RT
Miðflótta síueining (10 kDa MWCO)		2 x	RT
Miðflóttasöfnunarrör		4 x	RT

Aðeins til rannsóknarnota.

Þessi vara hefur takmarkaðan geymsluþol, vinsamlegast sjá fyrningardagsetningu á merkimiðanum.

MIKILVÆGT

Vörur geta verið sendar við mismunandi hitastig, en geymsla ætti að fylgja leiðbeiningunum sem lýst er í töflunni. Kvoðasurryn í hreinsunarsnúningssúlunni inniheldur 0.02% natríumazíð.

Viðbótarefni sem krafist er

Tafla 2. Viðbótarefni

Efni	Athugasemdir
Bekkur örskilvinda	Áskilið hraðasvið á bilinu 1,000 xg til 13,000 xg
Vortex
1.5 ml hvarfglös

Allar nauðsynlegar lausnir og biðminni eru innifalin í settinu.

Þriggja þrepa minnkun lífsameindar í hvarfröri

Vinsamlegast lestu alla siðareglur áður en þú byrjar og framkvæma öll skref án truflana.

ÁBENDING

Þessa samskiptareglu er hægt að framkvæma samtímis fyrir mörg tengiviðbrögð

Buffer skipti á próteini/mótefni

1. Vættu miðflótta síueiningarhimnuna með 100 µL afoxunarbuffi.
2. Bætið við u.þ.b. 200 µg (allt að 500 µg) af próteini/mótefni við síueininguna frá skrefi 1. Bætið Reducing Buffer við síuna þar til hámarksrúmmáli 450 µL er náð og skilið í skilvindu við 13,000 xg (allt að 14,000 xg) í 5 mín og farga gegnumstreymi.
3. Bættu við 350 µL af afoxunarbuffi og skildu við 13,000 xg í 5 mínútur og fargaðu gegnumflæðið aftur.
4. Endurtaktu skref 3, einu sinni enn með endanlegum skilvindutíma upp á 10 mín til að fá endanlegt rúmmál u.þ.b. 80 µL.
5. Safna sampLeið annað hvort með 100 µL pípettu í nýtt rör eða með því að setja síubúnaðinn á hvolfi í nýtt miðflóttaglas, skilið í 2 mínútur við 1000 x g.

Minnka með TCEP

1. Undirbúið 2.5 mM TCEP lausn í afoxunarstuðli með því að bæta 1 µL af 500 mM TCEP í 199 µL afoxandi buffer.
   Undirbúið alltaf beint fyrir notkun.
2. Bættu Reducing Buffer við sample hettuglasið fyrir heildarrúmmál 98 µL og bætið við 2 µL af 2.5 mM TCEP lausn til að fá endanlegan styrk upp á 50 µM TCEP. Blandið hvarfinu með því að pípa upp og niður.
3. Lausnin er ræktuð við 37°C við 400 snúninga á mínútu í 2 klst. til að tryggja algjöra minnkun.

Hreinsun og einbeiting

1. Jafnvægið tvær hreinsunarsnúningssúlur (rauð hetta) fyrir eina TCEP-þvott:
   a. Fjarlægðu botnþéttingu súlunnar og losaðu hettuna (ekki fjarlægja hettuna).
   b. Settu súluna í 2.0 ml hvarfglas.
   c. Miðflótta við 1,500 × g í 1 mín til að fjarlægja geymslulausnina.
   d. Bætið 400 µL af afoxunarstuðli í plastefnisrúm súlunnar. Miðflótta við 1,500 × g í 1 mín til að fjarlægja jafnalausn.
   e. Endurtaktu skref d og fargaðu jafnalausninni sem myndast úr hvarfrörinu. Hreinsunarsnúningssúlan ætti nú að vera í þurru ástandi.

TCEP þvott

a. Settu súlurnar frá fyrra skrefi í ný 1.5 ml hvarfglös.
b. Fjarlægðu lokið á snúningsdálki númer 1 og helltu varlega í sample efst á plastefni rúminu.
c. Miðflótta við 1,500 xg í 2 mínútur til að safna sample (í gegnumstreymi). Fargið hreinsunarsnúningssúlunni eftir notkun.
d. Fjarlægðu lokið á snúningsdálki númer 2 og helltu sample frá fyrra þrepi að plastefnisrúminu.
e. Miðflótta við 1,500 xg í 2 mínútur til að safna sample (í gegnumstreymi). Fargið hreinsunarsnúningssúlunni eftir notkun.
f. Thiol tenging samkvæmt notendahandbók (HK-MAL-1 eða HK-MAL-2) af minni sample er hægt að framkvæma.

Viðbótarupplýsingar

Buffer Exchange og styrkur með miðflótta síunareiningum 

1. Taktu eina miðflótta síueiningu, bættu viðeigandi magni af biðminni í síubúnaðinn og settu lok á það.
2. Settu lokuð síubúnað inn í skilvindu snúninginn, stilltu lokarólina í átt að miðju snúningsins; mótvægi með svipuðu tæki.
3. Snúðu tækinu við 13,000 xg (eða 14,000 xg) í tiltekinn tíma.
4. Fjarlægðu flæðið í gegnum og endurtaktu skref 1-3.
5. Fjarlægðu samsetta tækið úr skilvindunni og aðskilið síubúnaðinn frá örskilvindurörinu.
6. Til að endurheimta samtenginguna, settu síubúnaðinn á hvolf í hreint miðflóttarör, stilltu opnu lokinu í átt að miðju snúningsins; mótvægi með svipuðu tæki. Snúðu í 2 mínútur við 1,000 xg til að flytja sample frá tækinu í rörið.
   

Gagnleg pöntunarnúmer

Tafla 3. Pöntunarnúmer

Vöruheiti	Upphæð	Pöntunarnr
heliX ® Thiol tengibúnaður 1	5 x	HK-MAL-1
heliX ® Thiol tengibúnaður 2	5 x	HK-MAL-2
Miðflótta síueining (3 kDa MWCO)	5 stk.	CF-003-5
Miðflótta síueining (10 kDa MWCO)	5 stk.	CF-010-5
10x Buffer A [2]	50 ml (gefur 500 ml)	BU-P-150-10
5x Buffer B [3]	50 ml (gefur 250 ml)	BU-P-1000-5

Hafðu samband

Dynamic Biosensors GmbH	Dynamic Biosensors, Inc
Perchtinger Str. 8/10	300 Trade Center, Suite 1400
81379 München	Woburn, MA 01801
Þýskalandi	Bandaríkin

Upplýsingar um pöntun order@dynamic-biosensors.com
Tæknileg aðstoð support@dynamic-biosensors.com

1. Minnkun Buffer: 100 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 5 mM EDTA, pH 7.4
2. Buffer A: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 7.2
3. Buffer B: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 1 M NaCl, pH 7.2

VIÐSKIPTAVÍÐA

www.dynamic-biosensors.com
Hljóðfæri og flís eru hönnuð og framleidd í Þýskalandi.
©2024 Dynamic Biosensors GmbH | Dynamic Biosensors, Inc. Allur réttur áskilinn.

Skjöl / auðlindir

dynamic BIOSENSORS heliX plus Reducing Agent Kit 1 [pdfNotendahandbók RK-PA-1, heliX plús afoxunarsett 1, heliX plús, afoxunarefnissett 1, umboðssett 1, sett 1

Heimildir

• Notendahandbók